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牛诺如病毒和冠状病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

王文佳; 师志海; 兰亚莉; 徐照学 河南牧业经济学院制药工程学院; 河南郑州450046; 河南省农业科学院畜牧兽医研究所; 河南郑州450002; 河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室; 河南郑州450002
  • 牛诺如病毒
  • 牛冠状病毒
  • 犊牛腹泻
  • 双重聚合酶链反应

摘要:为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛冠状病毒(BCoV)的聚合酶链反应(PCR)检测方法,根据BNoV和BCoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BCoV的片段大小分别为542 bp和896 bp。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BNoV和BCoV的目的条带,未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BCoV的最低检测限分别为6.71×10^4 copies/μL和1.38×10^5 copies/μL。对采集自河南地区的127份犊牛腹泻样品的检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BCoV的阳性率为14.96%(19/127),与单项PCR检测结果相一致。结果表明,建立的双重PCR方法可用于BNoV和BCoV的检测及流行病学调查。

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