应用芯片式数字PCR检测人血清中登革病毒载量

摘要：目的建立芯片式数字PCR绝对定量技术,用于登革病例血清中登革病毒载量绝对定量并分析载量变化情况。方法选取发病1~7d登革实验室确诊病例血清样本,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,取3μL或4.5μL cDNA,配制15μL反应体系,采用QuantStudio 3D Digital PCR Chip Loader仪器制作芯片,将芯片置于Dual Flat Block GeneAmp PCR System 9700运行PCR,最后在QuantStudio TM 3D Digital PCR System中读取结果并应用QuantStudio^ TM 3D AnalysisSuite TM Software进行分析,根据实验稀释倍数计算血清中登革病毒载量。结果芯片制作良好,有效孔数高,检测结果重复性较好,示病例发病第1~7d血清中的登革病毒载量分别是10^7.646 ,10^7.544 ,10^7.298 ,10^6.990 ,10^5.823 ,10^4.732 ,10^4.221 copies/mL。结论应用芯片式数字PCR检测血清中登革病毒载量的方法可行,可应用于登革病毒载量的绝对定量。登革病毒载量随着病程的发展而降低。