应用RNA干扰技术抑制人胃癌细胞环氧合酶-2基因的表达研究

摘要：目的研究应用RNA干扰技术进行抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2的表达研究。方法依据siRNA设计原则，针对人COX-2的mRNA序列，设计并合成3条21bp的双链RNA，瞬时转染人胃癌细胞SGC-7901，Western印迹t验证基因沉默效率以筛选合适的siRNA序列；根据筛选出的有效序列，合成编码短发卡RNA的双链寡核苷酸，定向克隆到含有U6RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer^TM2．1-U6neo真核表达载体，稳定转染胃癌细胞SGC-7901中，经G418筛选，获得克隆细胞。结果筛选出一条有效的干扰序列，位于291—311bp，成功构建表达载体，COX-2在蛋白水平的表达明显被抑制。结论利用化学合成siRNA进行初筛，再构建shRNA表达载体，可快速实现目的基因的表达抑制。