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核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响

孙达权; 石松; 徐莹莹; 雷霆雯; 莫晓川; 王筑婷; 李红梅; 徐国强 贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室; 贵州贵阳550025; 贵州医科大学生理学教研室; 贵州贵阳550025
  • 肝肿瘤
  • 核不均一核糖核蛋白c2
  • 细胞
  • 细胞增殖
  • 真核表达

摘要:目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体p EGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力。结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成c DNA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体p EGFP-C1中,成功构建真核表达载体p EGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加。结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖。

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