pGV141-ROCK2真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

摘要：目的：克隆人Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）基因,构建pGV141-ROCK2真核表达载体,并观察其在人脐静脉内皮细胞（HUVEC-C）中的表达。方法：以RT-PCR的方法获得ROCK2基因的CDS区,经Xho I、Kpn I双酶切后,连接到pGV141载体中;将构建的pGV141-ROCK2真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将其转染入HUVEC-C中;采用western blot法检测转染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表达情况。结果：PCR法、双酶切法检测到的目标条带与目的条带大小一致,测序结果显示重组质粒中插入的ROCK2基因序列与Gen Bank编码上的编码区完全一致;与未转染重组质粒的HUVEC-C比较,转染pGV141-ROCK2载体的HUVECC中ROCK2蛋白的表达显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：成功构建pGV141-ROCK2真核表达载体,体外转染入HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表达显著增加。