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圆二色谱法分析金属离子对鲍鱼脯氨酰内肽酶的作用

李越; 颜龙杰; 翁凌; 章骞; 曹敏杰 集美大学食品与生物工程学院; 福建厦门361021; 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心; 福建厦门361021
  • 脯氨酰内肽酶
  • 皱纹盘鲍
  • 金属离子
  • 圆二色谱
  • 抑制剂

摘要:使用原核表达系统表达了皱纹盘鲍( Haliotis discus hannai )脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP),并对其进行高度纯化。SDS-PAGE结果表明,该酶的相对分子质量约为85 ku,其二级结构主要由α-螺旋(28.3%)、反向平行结构(17.4%)、平行结构(8.70%)、β转角(19.0%)、无规卷曲(28.5%)组成。选取PEP特异性荧光底物Suc-Gly-Pro-MCA测定其活性,并选取了多种常见金属盐溶液对其进行抑制作用分析。结果发现,Al^3+、Cu^2+、 Zn^2+、Ag^+和 Pb^2+能够抑制PEP的活性。利用圆二色谱法,对金属离子作用下PEP的二级结构变化进行分析和计算。分析结果表明,不同金属离子对PEP的作用效果不同:Al^3+、Cu^2+和Zn^2+在影响PEP结构时也影响其活性;Ca^2+、Mg^2+对PEP的结构和活性均不产生明显影响,而Ag^+和 Pb^2+可在不影响PEP二级结构的前提下抑制其活性。

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