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小反刍兽疫病毒间接化学发光抗体检测方法的建立与优化

任雪建; 李秀梅; 杨晓帆; 李亚静; 杨志; 耿玉静; 吕园园 洛阳现代生物技术研究院有限公司; 河南洛阳471000
  • 原核表达
  • 最适条件
  • 临界值

摘要:构建了原核表达质粒pET-28a-N,经原核表达纯化获得小反刍兽疫病毒N蛋白。将纯化的小反刍兽疫病毒N蛋白与对应的酶标二抗配对,通过对各个反应条件的优化建立了间接化学发光抗体检测方法。通过对血清样本的检测,对该方法的敏感性、特异性、重复性、符合率进行了评价。试验结果显示:N蛋白最适包被浓度为0.5μg/mL,最适包被条件为4℃24 h;酶标二抗最适工作浓度为1∶2000。特异性试验证明,该方法与羊常见病毒的抗体阳性血清没有交叉反应。通过检测大量小反刍兽疫病毒抗体阴、阳型血清,确定了科学的判定标准。

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