高效液相色谱-紫外/质谱评价海洋天然产物体外抑制环氧合酶2活性方法研究

摘要：目的建立基于高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)和高效液相色谱-多级离子阱质谱分析(HPLC-ITMS/MS)的海洋天然产物体外抑制COX-2酶的活性评价方法。方法采用Agilent Poroshell 120C18色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液为高效液相色谱流动相,二元等度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,检测波长210nm,进样量10μL;质谱条件下,流动相改为乙腈-0.05%乙酸水溶液,进样量为1μL,选用ESI离子源,负离子电离模式,喷雾气压35psi,干燥气(N2)流速12L·min^-1,干燥气温度350℃。结果建立的高效液相色谱-紫外和高效液相色谱-多级离子阱质谱法精密度和稳定性良好,对比两者测定酶底物花生四烯酸的适用性显示,基于HPLC-UV的评价方法适用极性较大的天然产物粗提物;HPLC-IT-MS/MS法则因其抗干扰能力强,适用于复杂体系中极性较弱的活性物质的检测。以建立的HPLC-UV和HPLC-IT-MS/MS方法对海洋天然产物的COX-2酶抑制活性进行评价,天然产物粗提物中黄海葵Anthopleura lanthogrammica Berkly乙醇粗提物和弯孢菌Curvularia lunata strain L2744发酵液粗提物对COX-2酶抑制作用较为明显,抑制率分别为70.1%和25.48%。结论建立的评价方法具有适用性强、结果可靠等优点,有望为天然产物粗提物中COX-2酶抑制剂体外筛选提供技术参考。