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高效液相色谱-紫外/质谱评价海洋天然产物体外抑制环氧合酶2活性方法研究

史倩; 陈军辉; 张大海; 郑立; 李先国 齐鲁工业大学(山东省科学院)海洋仪器仪表研究所; 山东青岛266061; 自然资源部第一海洋研究所海洋活性物质与现代分析技术重点实验室; 山东青岛266061; 中国海洋大学化学化工学院; 山东青岛266100
  • 环氧合酶2
  • 高效液相色谱紫外检测
  • 抑制剂筛选
  • 海洋天然产物

摘要:目的建立基于高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)和高效液相色谱-多级离子阱质谱分析(HPLC-ITMS/MS)的海洋天然产物体外抑制COX-2酶的活性评价方法。方法采用Agilent Poroshell 120C18色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液为高效液相色谱流动相,二元等度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,检测波长210nm,进样量10μL;质谱条件下,流动相改为乙腈-0.05%乙酸水溶液,进样量为1μL,选用ESI离子源,负离子电离模式,喷雾气压35psi,干燥气(N2)流速12L·min^-1,干燥气温度350℃。结果建立的高效液相色谱-紫外和高效液相色谱-多级离子阱质谱法精密度和稳定性良好,对比两者测定酶底物花生四烯酸的适用性显示,基于HPLC-UV的评价方法适用极性较大的天然产物粗提物;HPLC-IT-MS/MS法则因其抗干扰能力强,适用于复杂体系中极性较弱的活性物质的检测。以建立的HPLC-UV和HPLC-IT-MS/MS方法对海洋天然产物的COX-2酶抑制活性进行评价,天然产物粗提物中黄海葵Anthopleura lanthogrammica Berkly乙醇粗提物和弯孢菌Curvularia lunata strain L2744发酵液粗提物对COX-2酶抑制作用较为明显,抑制率分别为70.1%和25.48%。结论建立的评价方法具有适用性强、结果可靠等优点,有望为天然产物粗提物中COX-2酶抑制剂体外筛选提供技术参考。

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