短乳杆菌49蛋白提取及酶解条件优化

摘要：为了最大程度上获取短乳杆菌49(Lactobacillus brevis 49)的蛋白质信息,分别优化了蛋白质的提取条件与酶解条件。用正交实验法考察细胞破碎方法、蛋白酶种类、酶解时间、酶添加量4个因素对L.brevis 49的胞内蛋白提取方法以及酶解方法的影响,以质谱中检测到的蛋白质数目为参考指标进行优化;同时对培养基氮源进行优化,并分别选用TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法、平衡酚-丙酮法和超滤法提取发酵液中的胞外蛋白。结果表明:L.brevis 49胞内蛋白最佳的提取破壁方法为超声破碎法,最佳水解酶为糜蛋白酶和胰蛋白酶共同作用,最佳的酶与蛋白质量比为1∶50,最佳酶解时间为12 h,获得胞内蛋白数目527个。获得L.brevis 49胞外蛋白的最佳培养基为0.6%酵母浸粉做单一氮源的MRS培养基,最佳提取方法为三氯乙酸(TCA)法,可获得44个含信号肽蛋白。该方法有望为啤酒的安全检测提供参考。