自动化免疫分析精品(七篇)

序论：写作是一种深度的自我表达。它要求我们深入探索自己的思想和情感，挖掘那些隐藏在内心深处的真相，好投稿为您带来了七篇自动化免疫分析范文，愿它们成为您写作过程中的灵感催化剂，助力您的创作。

篇(1)

在医学高速发展的今天，随着先进技术的不断引入，临床医学检验获得日新月异的发展：高速度生化分析仪的装备，解决不断增长的检测量的压力；更灵敏的化学发光技术及后续研发投入，深刻地影响和拓展着免疫学检测领域的广度和深度；分子生物学技术、基因芯片、蛋白芯片技术的发展，必将会引领临床医学检验的全新变革，使得个性化的疾病诊断、治疗成为现实。

全实验室自动化（total laboratory automation，TLA）又称全程自动化（front to end automation） 是将临床实验室中各种独立的自动化仪器以特殊的物流传送设备串联起来，在信息流的主导控制下，构成流水线作业的组合，形成大规模的全实验室常规检验过程的自动化，国内也有称临床实验室自动化检验流水线。

基本结构：

1.标本运输系统（sample transportation system， STS）

1.1传输系统负责将样品从一个模块传递到另一个模块。

1.2现有的产品可分为两大类： 智能化传输带和智能自动机械臂，每一类中又有多种规格。

2.标本前处理系统（sample pre-analytical moudular system， PAM）

前处理工作站包括：

1.样品分类

2. 自动装载和样本离心

3. 样本去盖

4. 样本再分注及标记

3.自动化分析仪（automated analyzer）

4.分析后处理输出系统

输出缓冲模块包括出口模块和标本储存接收缓冲区，出口模块用于接收需人工复检标本以及离心完毕的非在线检测标本。标本储存接收缓冲区可进行在线自动复检，当LIS审核报告时，确认某一项目复检后，即向该模块发出复检指令，将需要复检的标本送入复查回路，并送至分析系统进行复检。

5.临床实验室信息系统， （laboratory information system， LIS）

实时完成从医院信息系统（hospital information system，HIS）下载患者资料、试验请求信息、上传标本在各模块的状态、标本架号位置、分析结果、通讯情况等。

全实验室自动化（TLA）是将众多模块分析系统整合成一个实现对标本处理、传送、分析、数据处理和分析过程的全自动化。标本在TLA可完成临床化学、免疫学、血液学等亚专业的任一项目检测。全实验室自动化包括：自动化标本处理、标本自动传送和分选至相应的分析工作站、自动分析、利用规范的操作系统软件对分析结果进行审核、储存已分析的标本并能随时对储存标本重新进行测试。

实验室自动化流水线作为临床检验医学发展的必然趋势，势必对实验室的管理和发展产生深远影响。它的引入不仅是提高工作效率，减少实验室运行成本，更重要的是建立一个实验室标准操作平台，提高了实验室管理水平和服务质量，以高质量的检测报告更好地服务患者，服务临床科室，服务于医院的长远发展

参考文献：

[1] Markin RS，Whalen SA. Laboratory automation： trajectory， technology， and tactics.Clinical Chemistry，2000，05.

[2]Sasaki M，Kageoka T，Ogura Clinica Chimica Acta，1998，02.

[3]Hoffmann GE.Concepts for the third generation of laboratory systems.Clinica Chimica Acta，1998，02.

篇(2)

【关键词】 梅毒螺旋体； 血清学检测； 化学发光； 核酸检测

梅毒是国家规定的血液筛查的项目之一，在乙肝、丙肝、艾滋三个项目已经开始采用核酸筛查血液时，梅毒检测现阶段有哪些更好的方法可以用在血液筛查中提高血液筛查效果呢？最近20多年，随着科学技术的迅速发展，梅毒的检测方法与技术也取得了长足进步，不仅表现在检测试剂的灵敏度和特异性不断提高上，还表现在化学发光技术与核酸检测技术（NAT）的引入。笔者现就梅毒螺旋体的实验室检测技术做一评述。

1使用类脂质抗原的梅毒螺旋体

血清学检测技术＼[1＼]此类试验主要包括VDRL、USR、RPR、TRUST等，其中VDRL和USR需要使用显微镜观察结果，RPR和TRUST用肉眼观察结果。

1.1VDRL（性病研究实验室试验）

20世纪50、60年代最为常用的梅毒血清学试验。反应素（梅毒螺旋体破坏机体组织过程中，机体产生的相应抗体）与抗原（从牛心中提取的心磷脂和从鸡蛋黄中提取的卵磷脂及胆固醇等有效成分）发生反应，试验时的摇动，使得反应素与抗原反应，形成的颗粒互相粘附，形成显微镜下可见的凝集沉淀，即为阳性。VDRL试验有几个缺点，即抗原需要每日配置；血清标本需加热灭活；要在显微镜下观察结果。因此，后来又推出了改良的USR和RPR。

1.2USR（不加热血清反应素试验）

本方法对VDRL抗原进行了改良，即将VDRL抗原稀释后，再将抗原悬液离心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2即氯化胆碱等的缓冲液。EDTA可使抗原半年内不变性，氯化胆碱可以灭活补体，这样就无需每天配置抗原，也无需血清加热灭活，但仍需显微镜下观察结果。

1.3RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）

本方法是在USR抗原的基础上，加入特制的活性炭颗粒，这样，抗原抗体反应呈现出黑色的凝集颗粒，在白色纸片上，肉眼易于观察。

1.4TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）

本方法是在前述抗原试剂中加入了甲苯胺红。甲苯胺红是一种颗粒均匀的化学染料，阳性结果呈现出红色的凝集颗粒，更加便于观察。目前，用于梅毒筛查的常用方法是TRUST和RPR。

上述4种试验都使用类脂质抗原，采用凝集反应方法测定，操作简单快速，但4种方法的特异性较差。多种疾病如类风湿关节炎、红斑狼疮等，会出现生物学假阳性。有报道在没有梅毒感染史的正常人群中上述实验会有0.1%的阳性率。TRUST方法曾经用于血液筛查，但从2000年起逐渐停用，取而代之的是灵敏度和特异性更高的酶免方法。

2使用密螺旋体抗原的梅毒螺旋体

血清学检测技术此类试验是梅毒特异性抗体检测试验，比较常用的有如下几种。

2.1TPHA（梅毒螺旋体血球凝集试验）

本实验是以梅毒螺旋体作为抗原的间接血细胞凝集试验。所用抗原为将梅毒螺旋体nichols株经超声裂解后得到的可溶性抗原成分，用其致敏火鸡或羊红细胞，然后用Reiter株（无毒株）制成的吸收剂稀释血清，吸收血清中的非特异性抗体。经过上述处理后TPHA试剂的特异性和敏感性均较高。本试验无需特殊设备，尚未实现自动化检测，试验中可发生自凝现象，需引起重视。由于TPHA试剂成本较高，且不能实现批量自动化检测，因此本方法暂不适合用于血液筛查。

2.2TPPA（梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验）

本实验原理与TPHA类似，其所用凝集颗粒为明胶颗粒而非红细胞。TPPA在2002年为美国疾病预防控制中心推荐用作梅毒确证试验，其灵敏度和特异性均较高，但试剂价格较贵。据文献报道，TPPA与ELISA检测结果之间符合性很好＼[2，3＼]。

有报道称TPPA试验可以实现自动化检测＼[2＼]，但未见TPPA试验自动化的明确报道。TPPA的自动化检测也是笔者科研立项的题目。如果TPPA可以实现自动化检测，那本方法是很适宜用作血液筛查的。应用TPPA作为血液筛查方法其意义不仅在于它是一项确认试验，还在于进行献血者告之时给予肯定的结果，从而避免引起各种纠纷。

2.3ELISA（酶联免疫吸附试验）

本方法所用试剂经过十余年的发展，现采用基因工程的方法，得到高纯度的梅毒螺旋体外膜蛋白作为抗原，大大提高了试剂的特异性。用于检测TP的IgG和IgM抗体。大量的试验表明其与TPPA，TPHA有较好的相关性＼[2，3＼]。本试验操作简单，可实现自动化检测，是梅毒血清学诊断试验的首选方法。现阶段血液筛查要求使用两个不同厂家生产的试剂进行筛查，本方法应用已经十分成熟。

2.4金标法

本法是以基因工程生产重组纯化的TP外膜蛋白，采用胶体金标法和免疫层析技术进行TP抗体的检测，该方法快速，简便，但有假阳性的结果，需做进一步的确认试验。本方法主要用于街头血液TP的快速筛查。

2.5FTA-ABS（荧光螺旋体抗体吸附试验）

本试验为定性试验，是公认的“经典”血清学试验。它是将Nichols株抗原涂在玻片上，然后用Reiter株制成吸收剂加入待测血清中，30min后将混合血清加在涂有抗原的玻片上37℃孵育30min，然后用PBS缓冲液冲洗晾干，加上荧光素标记的抗人IgG，37℃孵育后冲洗晾干，最后用荧光显微镜观察结果。由于本试验需要荧光显微镜，以及不能进行自动化检测，因而不适合应用于血液筛查中。

2.6WB（蛋白印迹技术）

20世纪80年代蛋白印迹试验逐渐发展起来，它是一种膜上免疫测定技术。首先将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞用超声波破碎，再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳将梅毒螺旋体各种抗原成分分开形成不同区带，经电转印可将这些条带转移到硝酸纤维素膜上作为抗原，最后用酶标技术检测病人血清中的相应特异抗原。如果出现特异性区带15.5KD和45KD，这时即可确诊梅毒。这种方法通常作为筛查阳性标本的确认试验。RPR， FTA-ABS，和TPHA，TPPA等试验出现的假阳性，用本实验检测均为阴性，有研究表明本方法要优于上述这些方法，是一种很不错的确认试验。

3化学发光免疫分析法

本法是化学发光法和免疫分析法结合的产物，是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，它采用化学发光反应试剂标记抗原或抗体，等其与待测物经过一系列反应后，测定发光强度以确定待测物的含量。该方法广泛用于各种抗原、抗体、酶、药物等物质的检测，是一项最新的免疫测定技术＼[4＼]。在检测梅毒抗体方面，三甲医院临床实验室逐渐采用化学发光免疫分析仪进行检测，在近几年的文献中多有报道，其结果与TPPA、ELISA等符合性较好＼[5，6＼]。由于其自动化程度高，检测快速，灵敏度特异性与TPPA持平或更高＼[5＼]，因此在血液筛查检测中也是一个很好的选择，其唯一不足之处在于检测成本较高。

4PCR（聚合酶链反应）

经过持续不懈的努力，对于梅毒螺旋体的基因结构已经清楚＼[7＼]，是由1，138，006个碱基对组成的环状DNA链，有1041个开放读码框架，已经发现TP膜抗原有22种，内鞭毛蛋白36种，其中外膜蛋白47KD蛋白和内鞭毛37KD蛋白具有高度免疫原性。以下就常用PCR的方法做一介绍。

4.1常规PCR

常规PCR首先要选取适宜的靶基因进行扩增。早在1990年，国外有学者使用tmp基因作为靶基因来设计相应引物，之后又曾尝试过bmp、47Kda等基因，但效果均不理想。2000年时，经研究比较发现，polA基因具有较高的特异性和敏感性＼[8＼]，随后将其用于引物设计。经过临床试验验证，其敏感性和特异性达到95.8%和95.7%，效果显著。常规PCR后期工作比较繁琐，因其需要做凝胶电泳。本试验需要重点控制的环节是防止扩增产物受到污染。

4.2多重PCR

本方法在常规PCR的基础上进行了改进。在使用靶基因作为引物设计上采用了多个特异性抗原基因设计多个引物同时扩增几条DN段。试验的反应原理、反应试剂、操作过程都与常规PCR一样。有学者应用多重PCR检测梅毒螺旋体感染者的标本后再与确认PCR比较，其一致率达99.3%，而且该方法很适合在常规实验室使用＼[9＼]。

4.3实时荧光定量PCR＼[10＼]

本方法是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。Holland及其同事最早提出了TaqMan原理＼[11＼]。利用这一原理，设计出了TaqMan荧光探针，使用实时荧光PCR仪实时检测荧光信号。在TaqMan荧光探针的基础上，进一步又发展了MGB探针＼[12＼]。我国学者徐瑾等构建了重组质粒PMD18-T-TP，建立了利用MGB-Taqman探针的实时荧光定量PCR＼[13＼]。几年之后，Leslie等使用改进的实时荧光定量PCR与血清学方法比较，结果Real-Time PCR的敏感性和特异性均较高。与常规PCR相比，实时荧光定量PCR不仅不需要电泳确证，因其采用闭管荧光检测，还大大减少了假阳性。实时荧光定量PCR的过程自动化程度高，其高灵敏度和特异性也使其广泛应用于医学检测的各领域。

4.4巢式PCR

又称二次PCR，也即进行两次扩增。本方法首先用外引物进行第一轮PCR，利用第一次扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增。有报道称巢式PCR可检测1.6fg的TP DNA，因此适用于检测血清等标本中微量的梅毒螺旋体。多名学者设计试验对巢式PCR与常规PCR、血清学方法进行比较＼[14＼]，实验结果显示巢式PCR与血清学方法无显著性差异，但与常规PCR有显著性差异。由于巢式PCR使用了两对引物进行了两次扩增，其敏感性和特异性均得到了增强，故可以作为血清学方法的补充用于梅毒螺旋体的诊断。

4.5逆转录PCR（RT-PCR）

本方法首先是提取目标细胞中总RNA，利用mRNA做为模板，反转录生成cDNA，然后将cDNA做为模板扩增，即可获得目的基因。虽然检测结果优于常规PCR，但其操作较常规PCR繁杂，注意事项较多，故不利于推广使用。

梅毒是一种由苍白密螺旋体引起的传染病，最近几年发病率逐年上升，这种情况对输血安全构成了严重威胁。实验室检测梅毒的方法较多，梅毒研究中常使用WB、TPPA和PCR三种方法；临床实验室常用的方法有ELISA、TRUST、TPPA、化学发光法等＼[15＼]；血液筛查是使用不同厂家的两种ELISA试剂进行。为了提高血液筛查水平，根据不同实验的特点，建议在血液检测中使用TPPA或化学发光法筛查梅毒，以便更好的保证输血安全。

参考文献

＼[1＼]李金明.临床酶免疫测定技术.北京：人民军医出版社，2005：220-223.

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＼[9＼]Mclver CJ， Rismanton N，Smith C，et al.Multiplex PCR testing detected higher than expected rates of cervical Mycoplasmas，Ureaplasmas，Trichomonas and viral agents in sexually active Australian women .J Clin Microbiol，2009，47（5）：1358-1363.

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＼[13＼]徐瑾，张顺.梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立和初步临床应用.江西医学检验，2005，23（6）：529-532.

＼[14＼]曾铁兵，吴移谋，黄澎杰，等.巢式PCR扩增梅毒螺旋体polA及其临床应用的研究.中国皮肤性病学杂志，2004，18（2）：74-76.

篇(3)

关键词：ADVIA Centaur XP；ARCHITECT i2000SR；比对试验

0 引言

随着国内化学发光免疫分析技术的不断成熟，化学发光免疫检测系统在临床上应用逐渐广泛。现对我院引进的ADVIA Centaur XP和ARCHITECT i2000SR化学发光免疫分析仪在甲状腺激素检验中进行比较分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年3月至2013年2月我院内分泌门诊和住院送检的120例甲状腺功能测定血清标本作为研究对象，其中低值40例，中值40例，高值40例。质控物为Bio-RAD质控血清，批号分别为40231、40232和40233[1]。使用仪器为ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪（西门子）和ARCHITECT i2000SR全自动化学发光免疫分析仪（雅培）及其配套试剂、标准品。

1.2 方法

对本组120例样品先后使用ADVIA Centaur XP和ARCHITECT i2000SR检测，记录检测数据。2台仪器均每日检测Bio-RAD质控血清在控[2]。将ARCHITECT i2000SR作为参考仪器（作为坐标轴X），按照ADVIA Centaur XP定标液浓度配制血清作为标准品对ADVIA Centaur XP（作为坐标轴Y）进行校正，再次比较分析检测结果[3]。

1.3 评价标准

参照澳大利亚室间质量评价标准以t±1.5s或t±15%为日间CV可允许范围；以系统误差（SE%）

1.4 统计学处理

所有数据均使用 SPSS17.0 数据分析软件进行统计学处理，差异性比较采用t检验，进行可靠性分析、相关性分析和回归分析，以P

2 结果

两台仪器不同Bio-RAD水平质控物游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）和促甲状腺素（TSH）检测结果显示3批质控物的日间CV及总CV均0.970。

由于ARCHITECT i2000SR质评成绩优秀且进行定期校准因此在研究中作为目标系统，ADVIA Centaur XP自配校准后，两台仪器检测结果差异无统计学意义（P>0.05），FT3及FT4检测结果均被临床接受（见表3）。

3 讨论

ADVIACentaur XP和ARCHITECT i2000SR均为临床常用化学发光免疫分析仪，由于两种仪器系统均采用顺磁颗粒和磁性分离技术，自动化程度和准确性都较高，能够测定包括内分泌激素、血药浓度、心血管疾病标志物、过敏原、肿瘤标志物以及免疫学各项指标等项目[5]。本组研究结果显示两台仪器在不同Bio-RAD水平质控物水平上日间CV及总CV均

参考文献：

[1] 王治国. 临床检验质量控制技术[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2004： 38-54.

[2] 龚智仁， 曹春晓， 杨琦， 等. ADVIA Centaur XP与ARCHITECT i2000SR化学发光免疫检测系统的比对试验[J]. 国际检验医学杂志， 2012， 33（04）： 467-469.

[3] 谭云昌， 曾正莲. 不同品牌化学发光仪检测甲状腺激素的相关性分析[J]. 检验医学与临床， 2010， 07（15）： 1622-1623.

篇(4)

【关键词】 化学发光免疫分析技术;基本原理;分类;应用

近10多年来,当代生物技术的研究和应用取得高速发展的同时,也大大推动了化学发光免疫分析方法(CLIA))的更新换代速度。化学发光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技术(RIA)理论的基础上,以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法,具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、操作方便、分析速度快和容易实现自动化和不污染环境等优点,特别是能在较短的时间内得到实验结果,因此深受检验医学工作者和临床医师的好评。

1 化学发光免疫分析的原理

化学发光免疫分析技术的基本原理,化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析两个系统[1]。免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测[2]。根据化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的含量。

2 化学发光免疫分析的分类

化学发光免疫分析根据应用发光体系应用于免疫分析中的方式不同可分为直接标记发光物质的免疫分析,酶催化化学发光免疫分析,电化学发光免疫分析(ECLIA)。直接标记发光物质的免疫分析,目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。

3 化学发光免疫分析的临床应用

CLIA已广泛应用于基础和临床医学的各个领域,成为替代RIA的首选技术。Amersham公司针对AmerliteTM发光增强酶免疫分析系统研制出的试剂盒项目有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素,与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮,以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。Amersham公司虽然研制出这10余种试剂盒,但因操作不够简便,检测项目仅限于蛋白质类大分子化合物,未能广泛应用于临床医学检测。

美国Ciba Corning公司研制的ACS:180自动CLIA系统能非常精确测量闪光。经过不断的改进,实现了ACS:180CLIA系统的全自动化,推出全新产品"ADVIA系列"。现有检测项目47项,更多的项目还在开发之中。主要有甲状腺系统、性腺系统、血液系统、肿瘤标记物、心血管系统、血药浓度及其他一些检测项目。

经过改良后,金刚烷衍生物在碱性磷酸酶作用下可发出高强度的辉光,光信号可持续1～2 h。随后国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物的试剂盒,与之相匹配的有DPC的IMMULITE全自动CLIA系统和Beckman的ACCESS全自动微粒子CLIA系统。IMMULITE全自动CLIA系统可检测项目有心脏病、甲状腺功能、性腺激素、传染病、药物、血清学、血液病、成瘾药物、糖尿病、过敏检测和肿瘤标志物。ACCESS全自动微粒子CLIA系统主要可检测甲状腺功能、血液系统、内分泌激素、药物、肿瘤因子、心血管系统和糖尿病等项目。

目前商品化的ECLIA分析系统只有Roche公司的ECLIA全自动分析系统。主要特点是本底信号极微,特异性更高,最小检出值可达1 pmol以下,操作十分简便快速,是CLIA优点较为集中的完美分析技术。已提供试剂盒的项目有肿瘤标志物、甲状腺功能、内分泌、传染病、心肌标志物和维生素类等项目。

王阳[3]运用了电化学免疫分析技术,检测了3种肿瘤标志物癌胚抗原(Carcinoem-bryonic Antigen,CEA)、细胞角蛋白l9片段(Cytokeratin 19fragments,CYFRA21,1)和神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)水平,对肺癌诊断有实际应用价值。张忠英[4]等利用电化学发光免疫分析技术检测尿CK19片段,结果显示尿CK19检测对膀胱癌等泌尿系统肿瘤诊断和复发监测具有敏感性高、无创伤性的优点,优于血清CK19和尿细胞学检查。动态观察尿CK19片段含量的变化可降低急性尿感患者的假阳性率。王利娜[5]等应用ECLIA测定和酶免疫测定(EIA)检测乙肝标志物。结果:应用ECLIA方法检测HBsAg精密度,最大批内变异≤8.30%,最大日间变异≤15.33%,HBsAg灵敏度0.05 ng/ml,HBeAg灵敏度0.03NCU/ml。HBsAg检测范围0.01～7 000 COI。显示ECLIA检测HBsAg灵敏度高,重复性好,检测范围宽。检测HBeAg灵敏度可能更高。李锦洲[6]等采用ECLIA法对卵巢癌、良性卵巢肿瘤及健康妇女血清CA125分别进行测定,ECLIA用于第二代CA125(CA125-Ⅱ)测定,使CA125测定更加敏感恒定,每日之间差异较小。黄琛,汤汉红等[7]在ECLIA法检测与蛋白质芯片法多肿瘤标志物结果差异的研究中显示:两种方法有较好的相关性(P

化学发光免疫分析技术在医学的临床应用已非常成熟,有取代放射免疫分析技术和酶联免疫分析技术而成为诊断市场上的主流产品的趋势。国外的化学发光免疫分析检测系统价格昂贵,普及有一定的困难;国内的化学发光免疫分析检测系统虽然价格较国外产品便宜很多,但其检测的灵敏度和可靠性,还有待进一提高。研究者在如何提高免疫诊断的敏感性和特异性、发展新的分析体系和检测技术便携化等方面仍需要不断努力。

参 考 文 献

[1] 李美佳.当代免疫学技术与应用.北京:北京医科大学国协和医科大学联合出版社,1998:549-561.

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[3] 王阳.电化学发光免疫分析技术检测3种肿瘤标志物对肺癌的诊断意义.Chin J Lab Diagn,2006,10(3):294-296.

[4] 张忠英.电化学发光免疫分析技术检测尿CK19片段的临床应用及其评价.中华检验医学杂志,2005,28(1):50-53.

[5] 王利娜,姚智.电化学发光免疫分析技术检测乙肝标志物的应用.天津医科大学学报,2008,14(1):48-50.

[6] 李锦洲,洪锡田,吕晓娴.肿瘤标志物CA125检测在卵巢癌诊断中的价值.中国误诊学杂志,2005,5(8):1456-1457.

[7] 黄琛,汤汉红,王敏民.蛋白质芯片技术与电化学发光技术检测多肿瘤标志物结果的评价.天津医药,2008,36(12):942-944.

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篇(5)

【关键词】 临床检验;应用;化学发光免疫技术

化学发光免疫技术具有标本用量较少、稳定性较高、标记物制备较容易、不污染环境、操作简便以及便于实现自动化等优点，主要将免疫分析与化学反光分析相结合，被广泛应用到临床医学和基础医学中。化学发光免疫技术是继酶免疫、发射免疫以及荧光免疫测定之后的免疫技术，在临床检验中经常需要检测和分析表征性物质，以判断疾病以及身体病理特征[1]。通过在临床检验中应用化学发光免疫技术，快速分析各种物质，能够提高检测的灵敏度与准确度。

1 化学发光免疫技术的概况

化学发光免疫技术主要包括化学发光分析和免疫分析系统，用于抗原、抗体、酶、激素、维生素以及脂肪酸等检测分析技术。化学发光分析是根据免疫反应情况，待免疫反应完之后加入酶或氧化剂等发光底物，发光底物经过氧化会形成处于激发状态的中间体，通过发射光子来释放能量，以达到稳定状态。而免疫分析是在抗体或抗原之上利用标记物进行直接的标记，标记物为化学物质或酶，待抗体或抗原发生反应后，会产生带有抗体免疫的复合物。

化学发光免疫技术的原理是以化学发光剂对抗体或抗原进行直接标记，待磁颗粒性、抗体或抗原发生反应之后，在磁场的作用下，分离处于游离状态和结合状态的化学发光剂，将发光促进剂加入到结合状态的部分，使其进行快速的发光反应，并以定性或定量的方式检测处于结合状态的发光强度。化学发光免疫技术系统具有操作较为简单，结果较为准确可靠，且自动化程度较高以及试剂储存的时间较长等优点，可根据激发态分子能量的来源，将化学发光的过程分为生物发光、光照发光和化学发光。

2 化学发光免疫技术在临床检验中应用的类别

化学发光免疫技术在临床检验中，主要分为酶催化化学发光的免疫分析、直接标记发光物质的免疫分析以及电化学发光的免疫分析。酶催化化学发光的免疫分析是通过抗体或抗原在标本中发生反应之时，采用发光的酶作为标记物。直接标记发光物质的免疫分析是采用吖啶酯对体或抗原进行直接标记，待抗体或抗原发生免疫反应后会产生一种复合物，加入氢氧化钠和带有双氧水的氧化剂后呈碱性，出现发光、分解等现象[2]。而电化学发光的免疫分析过程包括化学反光和电化学，将三丙胺作为电子供体，对抗体或抗原用三联吡啶钌进行标记，在电场的作用下，通过电子转移而产生发光反应。

3 在临床检验中应用化学发光免疫技术的分析

3.1 应用化学发光免疫技术分析传染性疾病 乙型肝炎病毒是血清学的标志物，是治疗和评价机体免疫功能的重要指标。诊断乙型肝炎病毒中的抗体或抗原的表面部分是否受到感染，这样的诊断为常规酶法，但常规酶法会使低病毒含量的携带者出现漏检的情况。化学发光免疫技术和以前的常规酶法相比，具有线性范围宽和高灵敏度等特点，在临床检验中应用化学发光免疫技术对传染性疾病进行分析，如对于已感染免疫病毒的儿童，应对其体内的甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒以及单纯疱疹病毒以Bowser等进行测定，检测出的灵敏度较高。

3.2 应用化学发光免疫技术分析肿瘤标志物 肿瘤标志物指肿瘤肿瘤在发生与增殖的过程中，通过肿瘤细胞进行合成、释放或者是机体与肿瘤细胞发生反应，产生酶、激素、白质以及癌基因产物等物质。患者的细胞、血液以及组织中都会有肿瘤标志物，利用化学发光免疫技术能够快速的寻找到难以发现的肿瘤标志物。通过对患者进行体外的辅助诊断以及术后监测，能够缓解患者的病痛。采用Mac等诊断和监测食管癌患者的病情，如对血清中的癌胚抗原浓度、鳞状细胞癌的抗原浓度等进行检测。以Raslan和Shabin对健康孕妇德阴道液和胎膜早破中的人绒毛膜促线性激素和AFP标志物进行比较，AFP的特异性和敏感度较高。

3.3 应用化学发光免疫技术分析心脏疾病 在临床检验中，经常以同丁酶对心脏疾病患者进行定量测定。心肌损伤的标志物包括肌酸激酶、肌红蛋白和肌钙蛋白T，应用化学发光免疫技术分析心脏疾病的标记物，能够提高检测的准确度。通过采用Dutra等将肌钙蛋白T(cTnT)的受体分子制成免疫传感器，应用于早期心肌梗死的临床检测，其方法较好，具有相关性，可以应用到临床中对标本进行检测。

3.4 应用化学发光免疫技术分析激素 激素是细胞和细胞间进行信息传递的媒介，主要指散在内分泌细胞中或内分泌腺所分泌出来的高效能的活性物质。在临床检测中应用化学发光免疫技术分析和测定性激素、甲状腺激素等激素，能够为临床诊断和治疗提供比较可靠、准确的实验室数据，提高检测的灵敏度和特异性[3]。通过以Vutyavanich等对血清中的促黄体生成素、素、促卵泡生成素以及催乳素等进行检测，以Karlsson对患者甲状旁腺进行检测，以Gayk和Schmidt对骨代谢标志物中的降钙素进行测量，并和放射免疫法相比，其精密度和准确度较高。

3.5 应用化学发光免疫技术分析其他物质 在临床检验中，应用化学发光免疫技术还可以分析细菌、维生素、免疫球蛋白、细胞因子、酶以及基因等。通过Dasgupta等对血清中高辛含量进行检测，以Quan等对食物中含有的盐曲霉毒素B1进行检测。

综上所述，化学发光免疫技术具有不污染环境、操作简便以及便于实现自动化等优点，被广泛应用到临床医学和基础医学中。在临床检验中应用化学发光免疫技术，能够为临床检验提供数据依据，提高检测的精密度和准确度。

参考文献

[1] 施丽娟.发光免疫分析技术及在临床检验中的应用[J].检验医学与临床，2012，6(4)：57-58.

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【关键词】实验室；自动化检测；管理；培训

【中图分类号】R185 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)07-0313-01

目前，九江市中心血站必须检测项目为：血红蛋白、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV（1+2）、抗TP、ABO血型正反定、RH(D)血型，另外我站还开展了ABO、RH血型效价的检测，吸收放散实验等项目。并对临床用血进行临床咨询与督导。

1 依据

严格按照《献血法》、《血站管理办法》、《血站质量管理规范》和《血站实验室管理规范》要求，制定严格的管理制度和实验室检测程序。不断改进，提高血站的自动化检测管理水平，使病患者使用合格、放心的血液，创立血站的品牌效应。自2008年，我站通过了ISO9001:2000国际认证，并每年由认证公司来进行认证，2010年正式升级为为ISO9001：2008版认证，同时培养了一批内审员，并进行考核获得了上岗证。实行内审员轮流对从血液采集到血液的发送整个操作流程进行审核，每年还进行质量审核。在现有工作程序的基础上，不断提出问题、发现问题、解决问题，不断推进改革与创新。

2 人员素质

对每位新进入员工，由资深工作人员带教，经过培训合格，并取得国家规定的血站工作人员上岗证，而HIV的检测必须要求持有全省HIV培训结业证才能独立操作HIV的检测并有签名权。对报告的最终判定及发送，必须由经过培训及授权的人员审核整个实验过程反复核对后才能最终将结果发送至供血科，供临床使用。

还要求每位员工必须每年有75课时的培训，年初制定出每月的培训计划，不断的完善工作中的不足，对已发生的错误要求开科室质量会议全科人员共同探讨原因，并分析原因及时提出预防措施，提高工作效率。对检测过程中存在的不足，共同讨论寻求最佳处理方法。

3 设备与仪器管理

建立和实施仪器设备的确认，维护、校准、备案等制度，必须具有唯一的标识专人专管。每日做好仪器的维护、保养，每月专人进行全面维护、保养，另对关键设备要先进行确认有备用设备及紧急预案措施，并要求有UPS电源。关键设备有公司、工程师定期校准。硬件方面：1998年，已由国家配发了一台RSP加样仪，2003年，我站首次购买了FAME16/20；全自动酶免检测系统，完成了从进板到加样、洗板、孵育，读板等程序的自动化检测过程。2009年，我站投入大量资金严格按《病原微生物实验室生物安全管理条例》要求升级改造实验室。自2006年以来，我站已完成了血型自动化检测的模式，避免了人为误差，血型档案从无原始档案发展为有资料可循，与免疫结果一样具有可追溯性。到2009年，我站由于采血量的加大，不能满足我站的检测要求，又增加了一台FAME24/30与加样仪STAR，这样使我站的检测真正做到同一标本，不同的试剂，不同的工作人员，不同的仪器设备进行检测，降低了漏检发生的可能性。在2009年我站在全省第二个运用了实验室结果及质量检测软件Liswell，这样从标本的交接、检测、结果、标本保存、销毁、都有一套完整的记录程序，并对每个过程都以书面形式保存和备份，真正实现实验室的自动化、标准化、现代化管理。且对每日的结果数据备份成光碟，定期交档案是存档。并于2010年新引进了日立全自动生化分析仪，运用速率法更准确的检测ALT。

4 试剂与标本处理

所用试剂必须经国家认可，经质检部门及本站质控科确认合格的试剂，使用前将试剂放于室温平衡半小时，使用前检查试剂的完整性，并按比例配制试剂等，并将实验室温度严格控制在18-25。C，45%-80%。

九江市现用试剂部分为进口试剂，这样有效缩短了窗口期，对提高病人的用血安全和工作人员自我保护起到了一定作用。并严格执行试剂的保存、出入库、交接手续等制度。在标本处理完毕后，按顺序将标本放置全自动加样仪，按先加酶免，再加血型的原则，因免疫加样仪为STAR一次性加样尖，而血型加样为RSP加样仪，而血型加样仪为反复加样针，以此避免标本的污染。

血液的标本在本站目前还是一个标本做多个项目，在本实验室要求5ML+1ML的标本量，并要求在外采血后针头不拔出试管，并在检验科标本交接时仔细核对试管上的条码与血辫上的条码是否一致，避免张冠李戴现象。观察血标本的外观，有无溶血，脂血的异常现象，如发现任何问题，填写标本返工单，要求外采人员重新取样，确保标本符合各检验项目的要求。

5 操作流程要求

对检验科免疫项目的检测原始记录，整个实验操作步骤精确到每分每秒，保证有据可依，所有相关记录做到”做我所写，写我所做。确保检测项目、实验步骤、检测结果的准确性和可靠性，具有可返溯性。同时，还实行了严格的档案管理制度，定期进行总结、整理、汇总、归档。

参考文献

[1] 卫生部：血站质量管理规范[S].2006年，167

[2] 卫生部：血站实验室质量管理规范[S].2006年，183

[3] 段瑞.血站实验室自动化检测与管理[J].实用医技杂志，2008(30)

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1 SELEX技术简介

1. 1筛选过程

SELEX技术依据分子生物学的原理，首先人工构建一个随机寡核苷酸文库，随机核苷酸序列的长度为20-40bp左右，所包含的不同种立体构象，几乎可以涵盖自然界存在的所有种类的靶分子。将靶标物质与随机文库在一定条件下进行混合，形成文库洋巴标复合物，把未结合的核酸洗脱掉，富集与靶物质结合的核酸分子，以后者为模板进行PC R扩增，得到的产物经分离纯化后，作为进行下一轮筛选的模板。如此反复，通过多轮(8-15轮)筛选，与靶标不结合或亲和性弱的核酸分子被充分去除，而与靶分子亲和性强的核酸分子被分离出来，同时其纯度随着筛选轮数的增加而增加。最后筛选到的文库要经过克隆测序和特异性修饰，经过这些步骤后，所获得的特异识别靶分子的核酸才是适配体。

1.2优势和特点

1)亲和力高、特异性强。适配体与靶标之间，凭借彼此互补的三维结构，相互作用后形成牢固稳定的复合物，其解离常数通常能达到pmol/L-nmol/L的水平，并且能分辨出靶标结构上细微的差别。

2)库容量大，识别范围广泛。SELEX技术的靶标远远多于经典的抗原抗体结合反应，除了有蛋白质、核苷酸分子外，还可以是糖类、氨基酸、维生素、抗生素、金属离子、有机染料，甚至可以是细菌、病毒、寄生虫等完整的细胞或组织，几乎囊括了自然界中的全部物质。

3)合成容易，获得方便，易于修饰。适配体的体积比传统抗体小，筛选过程简便、周期短，对实验室的要求不高，并具备自动化控制的巨大潜力。经过化学合成和修饰以后可保持原生物活性不变，还可以增强其稳定性并增加其他新的化学性质，参加多类反应。标记了荧光、生物素和纳米金颗粒之后，发展出了诸如分子成像技术等疾病诊断新方法。

4)重复性好，纯度高。整个筛选和制备的过程在人为控制之下，所得到的适配体几乎没有生产批次之间的差异，便于日后的大规模生产和应用。

5)分子量小、稳定性高。相对于抗体或酶，适配体的化学性质更稳定，不易降解，对温度不敏感，保存时间长，即使变形也能在很短的时间内复性，利于室温下运输。

6)应用便捷。SELEX技术所获得的适配体又被称作是核酸型抗体，其优于传统抗体的性质是没有免疫原性，因此便能获得一些低免疫原性甚至无免疫原性靶分子的适配体。并且还省去了传统抗体制备过程中的动物实验，而直接从体外文库中获取。而且适配体更容易通过细胞膜，并且没有毒性，利于检测细胞内的靶分子和实现多层次的调控，并能较快地被机体清除代谢掉，经过特定的化学修饰后，还可使半衰期延长，稳定性提高，便于科学研究和疾病诊治。

2 SELEX技术的发展

目前SELEX技术出现了一些新的筛选方法，越来越多的与各种标靶相对应的适配体被筛选出来。如毛细管电泳法、硝酸纤维素膜过滤法、磁珠分离法、亲和色谱法、Non SELEX技术、无引物PCR SELEX技术、微流体SELEX技术、生物芯片SELEX技术、原子力显微镜等各种新的模式也被应用到适配体的筛选中。同时还出现了SELEX技术与定量PCRSEL-EX技术与流式细胞仪、SELEX技术与ELISA的联合应用，更是极大的提升了筛选的效率和准确性。

2. 1消减SELEX技术

消减SELEX技术是一种经过改良的SELEX技术。以完整细胞为靶标的消减SELEX技术，是在筛选过程中以完整的细胞作为靶标，并消减掉能与已知或未知的共有靶标结合的配体，经过消减后的次级随机文库再投入到特异靶标的筛选中。它的意义在于可以实现从两组高度同源的完整细胞中，筛选出针对其中一种细胞的特异性适配体。这项技术可应用于发现新的肿瘤细胞识别结构，还可进一步作为生物导弹，独立完成靶向治疗或携带药物，未来将会在肿瘤的治疗中发挥巨大的功效。

2. 2自动化SELEX技术

传统的SELEX技术过程需要完成一套重复繁琐的操作，使得筛选相对耗时耗力。自动化SELEX技术的建立可以简化筛选过程，节约时间和物品的消耗，实现高通量和限定范围，达到同时筛选多个靶分子的效果。自动化SELEX技术离不开现代分离仪器的配合，后者的发展推动了前者的进步。2001年等使用Biome 2000自动化工作站成功筛选到了溶菌酶的特异性适配体，通过这种自动化筛选平台，不到2d就完成了12轮的筛选。

2. 3导向SELEX技术

适配体的特异性是整个SELEX技术的核心所在，为了提高适配体的特异性和稳定性，可将已知的能与靶标非特异结合的分子掺入到文库中或预先与靶标进行混合后再筛选，这样可获得只与靶标特异结合的适配体。2002年Hamm等将此技术与抗个体基因型的方法联合运用，成功获得了特定激酶抑制剂的特异性RNA适配体。Martell运用特殊的导向SELEX技术，从随机表达盒杂交文库中筛选到了能与E2F蛋白具有高亲和性的RNA适配体。

3 SELEX技术在医学中的应用

3. 1 SELEX技术在基础医学研究中的应用

依据核酸适配体具有与靶物质高特异性结合的能力，可以帮助我们寻找到疾病的发病机制。Roulette等提出把SELEX技术同基因表达串行分析手段联合应用，并通过自动化的序列提取工艺，建立转录因子结合位点的定位模型。通过对转录因子适配体文库中的某一序列进行测序，可了解该蛋白结合位点的特异性，探寻一些以前在基因组中从未研究过的结合位点，掌握在不同的核苷酸位点上非独立碱基出现的先后顺序，为阐明其结合机制提供一些线索等采取SELEX技术发现，TRF1二聚体在端粒上有两个相同的识别半位点，它们的距离可以变化，且两个半位点的顺序方向没有区别。这为探索端粒长度的调节机制提供了新依据。

3. 2 SELEX技术在疾病诊断中的应用

肿瘤细胞及其标志物的早期检测对于肿瘤的诊断及预后极为重要，目前已经筛选出多种肿瘤的特异性适配体，例如急性髓系白血病的适配体,急性淋巴细胞白血病的适配体、、恶性胶质瘤的适配体淋巴瘤的适配体TDOS、非小细胞肺癌的适配体、小细胞肺癌的适配体、乳腺癌的适配体、结肠癌的适配体、小鼠肝癌的适配体、卵巢癌的适配体。它们可以特异地识别肿瘤细胞，仅需少量肿瘤细胞即可实现准确的鉴别和分型。将适配体与纳米颗粒结合后通过比色检测，观察颜色的变化即可判断有无靶标细胞。这个实验非常敏感，样本中的靶细胞数超过百个即可检测出来，还不需要昂贵的检测设备和待检靶标的标记与修饰。因此，有可能成为常规筛查活体标本中新生肿瘤细胞的一种新方案。与此同时肿瘤细胞的分子成像技术也已经问世，它能够从细胞水平对生物过程进行可视化描述及测量，不仅能定位病灶，观察某些影响肿瘤细胞行为的生物过程，还能观察肿瘤细胞对药物的反应。Kim等研究将前列腺特异性膜抗原(PSMA)的特异性适配体与金纳米材料结合后，带有PSMA的前列腺癌细胞便能够被特异性地标记出来，将其作为造影剂应用在前列腺肿瘤的影像学诊断中，比传统的造影剂显像时间更持久，毒副作用更小，应用价值更显著。

SELEX技术还在血液的生化检查方面，显示出一定的应用前景。用其检测血液中的某些靶分子，将比传统方法更特异和高效。脑尿钠肤(BNP)常被临床上用来评价急性心力衰竭或急性呼吸窘迫症患者的病情和预后。Lin等采用SELEX技术的原理，筛选到了能与BNP特异结合的适配体。在微流体试验模式下，被荧光标记的适配体可以快速测出血液中BNP的浓度，比放射免疫分析法或是免疫分析技术更精确、更经济。反应蛋白(CRP)是机体在应激状态下生成的一种非特异性的急性时相反应蛋白，CRP与冠状动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管疾病具相关性。Bin等开发出了一种带有光化学性质的CRP特异性适配体，当血液中的CRP浓度超0.005mg/L时就能被检测出来，敏感度非常高。这一成果为新型CRP诊断试剂的研制奠定了基础。

SELEX技术还被应用在病原微生物的检测，其能克服传统检测方法在特异性和敏感性上的缺陷，为新型检测试剂盒的开发提供有力支持。例如结合分支杆菌的特异性适配体CSRI 2. 11检测过程比传统的培养鉴定法更省时更敏感;丙型肝炎病毒的适配体ZE2可结合酶联免疫吸附试验实现丙型肝炎的早期筛查，不受抗体检测时窗口期的制约;疟原虫乳酸脱氢酶的适配体PL1在临床实践中，可以很好的区分患者是否感染了出间日疟原虫或恶性疟原虫。

3. 3 SELEX技术在疾病治疗中的应用

SELEX技术在疾病治疗中的功效越来越来受到人们的重视。适配体在体内与靶分子结合，理论上可以对靶分子的生理功能和代谢过程产生影响，靶分子也会因此发生信号传导的改变甚至丧失原本的功能，直接或间接阻断疾病发生进程。以此开发的靶蛋白功能阻断剂，日益显示出其巨大的潜力。全球首个适配体药物是2004年由美国食品和药物管理局批准上市的呱加他尼钠，可用来治疗老年性黄斑变性。

SELEX技术在凝血系统疾病的治疗上具有一定的意义，已找到了可用作抗凝血和抗血栓药物的适配体，其结合的位点是凝血酶的肝素结合位点以及纤维蛋白原结合位点。在治疗免疫系统疾病方面，也已获得了具有药物开发潜力的特异性适配体，如可用来拮抗自身抗体已达到治疗系统性红斑狼疮的适配体，还有能刺激T细胞释放的适配体。对于肿瘤的治疗，基于SELEX技术研制的适配体药物更是走在前列，进入到了临床试验阶段。如对实体瘤和复发性急性髓样白血病有良好疗效的AS1411，更出现了连接金纳米棒的适配体，用作肿瘤靶向光热治疗回。适配体药物作为抗病毒药，也展现出良好的前景，比如用来抑制狂犬病病毒的复制和干扰艾滋病病毒的体内合成。除此以外，核酸适配体还可作为运输工具，特异性地把药物运送至靶标细胞或组织达到定点清除的治疗效果，研究比较成熟的有装载着阿霉素，用来杀伤前列腺癌细胞的复合适配体药物。